实习报告

　　院 系:专 业：应 用 化 学学 号： 姓 名： 指导教师：任梅蓉 李靖 赵宇 贾璐 日 期：201x年06月21日

　　序言

　　生物化学是用化学的原理和方法，研究生命现象的学科。通过研究生物体的化学组成、代谢、营养、酶功能、遗传信息传递、生物膜、细胞结构及分子病等阐明生命现象。

　　生物体内几乎所有的化学反应都是酶催化的。酶的作用具有催化效率高、专一性强等特点。酶的结构与功能的关系、反应动力学及作用机制、酶活性的调节控制等是酶学研究的基本内容。通过X射线晶体学分析、化学修饰和动力学等多种途径的研究，一些具有代 表性的酶的作用原理已经比较清楚。70年代发展起来的亲和标记试剂和自杀底物等专一性的不可逆抑制剂已成为探讨酶的活性部位的有效工具。多酶系统中各种酶的协同作用，酶与蛋白质、核酸等生物大分子的相互作用以及应用蛋白质工程研究酶的结构与功能是酶学研究的几个新的方向。酶与人类生活和生产活动关系十分密切，因此酶在工农业生产、国防和医学上的应用一直受到广泛的重视。

　　生物化学对其他各门生物学科具有深刻的影响，最紧密的有细胞学、微生物学、遗传学、生理学等领域。通过对生物高分子结构与功能进行深入的研究，揭示了生物体物质代谢、能量转换遗传信息传递、光合作用、神经传导、肌肉收缩、激素作用、免疫和细胞间通讯等许多奥秘，使人们对生命本质认识跃进到一个崭新的阶段。应用一直受到广泛的重视。

　　分离纯化意义：（1）分离大分子，研究其结构与功能，对于了解生命活动规律有重要意义（2）满足工业生产的需要（3）满足医疗的需要（4）满足基因工程的需要生物体内几乎所有的化学反应都是酶催化的。酶的作用具有催化效率高、专一性强等特点。酶的结构与功能的关系、反应动力学及作用机制、酶活性的调节控制等是酶学研究的基本内容。通过X射线晶体学分析、化学修饰和动力学等多种途径的研究，一些具有代 表性的酶的作用原理已经比较清楚。70年代发展起来的亲和标记试剂和自杀底物等专一性的不可逆抑制剂已成为探讨酶的活性部位的有效工具。多酶系统中各种酶的协同作用，酶与蛋白质、核酸等生物大分子的相互作用以及应用蛋白质工程研究酶的结构与功能是酶学研究的几个新的方向。酶与人类生活和生产活动关系十分密切，因此酶在工农业生产、国防和医学上的应用一直受到广泛的重视。

　　生物大分子的分离纯化一般可以分为以下几个阶段：○1材料的选择和预处理；○2破碎细胞及提取；○3分离和纯化：包括粗分级分离和细分级分离；其中前两个阶段为生物大分子分离纯化的前处理。

　　离心的原理：将样品放入离心机转头的离心管内，离心机驱动时，样品液就随离心管做匀速圆周运动，于是就产生了一个向外的离心力。由于不同颗粒的质量，密度，大小及形状等彼此各不相同，在同一固定大小的离心场中沉降速度也就不同，由此便可以得到相互间的分离。受到的力：离心力、介质的摩擦阻力、浮力、重力及重力浮力(均可忽略不计)

　　本次试验包括“各谷物中营养成分的测定”和“苯丙氨酸解氢酶的纯化及活性测定”两个试验。

　　苯丙氨酸解氨酶（L-phenylalanine：ammonie lyase，简称PAL；EC4.3.1.5）是植物体内苯丙烷类代谢的关键酶，与一些重要的次生物质如木质素、异黄酮类植保素、黄酮类色素等的合成密切相关。在植物生长发育和抵制病菌侵害的过程中起重要作用。PAL催化L-苯丙氨酸裂解为反式肉桂酸在290nm处有强大的吸收值。规定1h内增加0.01为PAL的一个活力单位。酶的比活力是指样品中每毫克蛋白所含的酶活力单位数。在实验中将会看到随着PAL的逐步被纯化，其比活力也在逐步增加。

　　在蛋白质溶液中加入一定量的中性盐（如硫酸铵、硫酸钠等）使蛋白质沉淀析出称为盐析。溶液的盐浓度通常以盐溶液的饱和度表示，饱和溶液称100%饱和度。沉淀一种酶所需的具体浓度需要经试验确定。

　　谷类含蛋白质在8-12%之间，因谷粒外层蛋白质较里层含量高，因此，精制的大米和面粉因过多的去除外皮，使蛋白质含量较粗制的米和面低。谷类脂肪含量较少，约2%，但玉米和小米可达到4%,主要存在于糊粉层及谷胚中。大部分为不饱和脂肪酸，还有少量磷脂。胚芽油中含有较多的维生素E，有抗氧化作用。